日本老化制御研究所酸化ストレス研究用試薬：ビタミンC測定キット印刷用ページ

Rev.140516

ビタミンC測定キット
(Vitamin C colorimetric assay kit)

（酸化ストレス研究用試薬）

成分：硫酸（80%）

【ビタミンC：食品由来の重要な抗酸化ビタミン】

ビタミンC（アスコルビン酸）は細胞質および細胞外マトリクスに存在し、生体内における抗酸化防御を担っています。生体内においてビタミンCは2通りの方法で抗酸化作用を発揮すると考えられています。一つは活性酸素種（特にペルオキシラジカル）との反応、もう一つはビタミンE（αトコフェロール）の再生です。抗酸化物質として作用する一方で、ビタミンC濃度や遷移金属に依存して酸化促進剤として作用する場合が知られています。例えばビタミンCはFe³⁺を還元しFe²⁺を生成します。Fe²⁺は H₂O₂と反応してOH・ラジカルを発生します。酸化ストレス負荷により血中ビタミンC濃度が低下することが報告されており、例えばHIV感染により血漿ビタミンC濃度が75.7μmol/Lから40.7μmol/Lに低下することが知られており、また、喫煙によってもビタミンCが多量に消費されます。生体内においてはビタミンCプールが欠乏するとタンパク質チオールの酸化、脂質過酸化が起きると考えられています。
本キットはヒトおよび動物由来の血漿ビタミンC濃度を測定します。血液中においてビタミンCはアスコルビン酸およびデヒドロアスコルビン酸の形で存在しますが、本キットでは測定前に全てデヒドロアスコルビン酸に変換して測定しますので、アスコルビン酸+デヒドロアスコルビン酸のトータル量を測定します。

【製品仕様】

● 測定対象：	Li-Heparin血漿、尿
● 測定レンジ：	0.7-30 mg/L
● 所要時間：	約3.5時間
● サンプル所要量：	約200μL
● テスト数：	96wells (N=2測定時 41サンプル測定可能)
● 必要な器具：	マイクロプレートリーダー（測定波長492nm）、8チャンネルマイクロピペット（50～250μL）、マイクロピペット（10～50μL用）、37℃インキュベーター、エッペンドルフチューブ（1.5mL）、プラスチック試験管（15mL）、蒸留水
● 保存条件：	冷蔵（パッケージ本体 2～10℃ ・凍結不可）および冷凍（コントロールバイアル -20℃） ※包装が冷蔵と冷凍の2個に分かれております。ご注意ください。

（本キットはHPLC法と高い相関性を示します。）

【ご注意】弊社の提供する試薬、受託分析サービス等は全て研究用です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。

【測定手順】

1.	標準物質およびコントロールを、蒸留水を用いて溶解します。
2.	標準物質／コントロール／血漿サンプル 200μLをエッペンチューブに入れ、続いて沈降試薬200μLを添加します。
3.	ボルテックスにて1分間攪拌したのち、10000Gにて30分間遠心します。測定には上清を用います。
4.	測定直前にＡ試薬（6mL）に対しＢ試薬（600μＬ）およびＣ試薬（600μＬ）を混合し、測定試薬を調製します。
5.	マイクロプレートに標準物質／コントロール／サンプルを処理した上清100μL/well分注します（N=2）。
6.	各ウェルに測定試薬 50μLを分注し、37℃にて3時間インキュベート。
7.	各ウェルに反応停止液 150μLを分注します。
8.	プレートシェーカーを用いて室温にて20分間振とうします。
9.	マイクロプレートリーダーを用いて492nmまたは520nmの吸光度を測定します（対照：620nm）。
	※採血後のビタミンCは壊れやすいため、サンプルには新鮮または凍結血漿（Li-Heparin血漿）をお奨めします。

【キットの構成】

1.	沈降試薬(Precipitation reagent)	15mL×1本
2.	A試薬(Reagent solution A)	6mL×1本
3.	B試薬(Reagent solution B)	1mL×1本
4.	C試薬(Reagent solution C)	1mL×1本
5.	反応停止液(Stop solution)	20 mL×1本
6.	標準物質（凍結乾燥品・400μＬ用）	4本
7.	コントロール（凍結乾燥品・250μＬ用）	2レベル×4本
8.	マイクロプレート（12*8 wells）	1枚（96穴）
9.	プレートシール	2枚

【参考文献】

1)	Determination of ascorbic and dehydroascorbic acids in blood plasma and serum by liquid chromatography. Esteve MJ, Farre R, Frigola A, Garcia-Cantabella JM: J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 688(2),p345-349 (1997)

品名	商品コード	測定レンジ	所要時間	価格（税込）
ビタミンC測定キット	KVC-030DT	0.7～30 mg/L	約3.5時間	132,000円

【製造元】：Immundiagnostik AG, Germany

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