酸化ストレスマーカー：タンパク質過酸化物(AOPP) 測定キット Advanced Oxidation Protein Product Assay Kit

Rev.171107

タンパク質過酸化物(AOPP)
測定キット
Advaned Oxidation Protein Product Assay Kit

（酸化ストレス研究用試薬）

【AOPPとは】

Advanced oxidation protein products (AOPP)とは次亜塩素酸（HOCI）が血漿タンパク質に反応して形成される酸化損傷生成物の総称^1）です。AOPPの血清クリアランスの遅れは、AOPPはアテローム性動脈硬化病変の病理に関わっているとされています^2）。AOPPは尿毒症において酸化ストレスのメディエーターであることが示されているほか、冠動脈疾患の独立したリスクファクターであることが報告されています。高コレステロール血症ウサギを対象にした試験では AOPPの静脈投与によってアテローム性動脈硬化病変が促進されることが確認されております ^3）。末期腎疾患（ESRD）患者や、透析患者、強直性脊椎炎（AS）患者、糖尿病ラット（GKラット）などで高値を示します。

【AOPPの特徴】

AOPP測定値は脂質酸化マーカーとは異なる挙動を示します。例えばAOPP測定値は血漿中のジチロシン濃度やAGEペントシジンと相関する一方、TBARS（脂質酸化物）には相関しないとされています。ラット腎疾患モデルでは、血漿MDAは上昇しない一方、AOPPは上昇します^4）。また、子癇患者ではMDAが上昇するのに対しAOPPは上昇しないことが知られています。脂質系の酸化ストレスマーカーとは異なる挙動を示すタンパク質酸化損傷マーカーとして期待されています。
健常者を対象にした研究では、低酸素下での激しい運動によってAOPPが上昇すること、白ワイン摂取によりAOPPが低下することが報告されています ^5）。また、菜食主義者90名と通常食者46名を対象とした研究では、AOPPがメタボリックシンドロームの独立したリスクファクターであることが示唆されております^6）。また、最近になり尿中でもAOPPを測定可能であることが報告されており、大腸がんおよび乳がん患者において高値を示します⁷⁾。本キットはEDTA血漿および尿サンプルを対象に、AOPPを簡便迅速に測定するものです。96穴マイクロプレートを使って比色法（340nm）にて測定します。

品名	商品コード	測定レンジ	測定波長	価格（税込）
AOPP測定キット	KAP-100D	6.25～100μmol/L	340nm	104,500円

【ご注意】本製品は研究用試薬です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。

【AOPP測定キット構成品】

マイクロプレート：	96穴（8*12分割タイプ）1枚	そのまま使用します。
アッセイバッファー：	1本（約65mL）	そのまま使用します。
標準物質：	4本（凍結乾燥品）	蒸留水1mLを加えて溶解します。濃度はラベルに記載。
コントロール：	2本（凍結乾燥品）	蒸留水1mLを加えて溶解します。溶解後は-20℃以下で2ヶ月間使用できます。
脱脂処理試薬：	1本（約2.5ml）	そのまま使用します。

【測定プロトコル】

スタンダードの調製：	1)	蒸留水を添加して溶解します。溶解方法、溶解後の濃度は、キット同梱のデータシートに記載されています。アッセイバッファーを用いて、S1（0µmol/L）～S6（100µmol/L）を調製します。溶解後のスタンダードは不安定であり、保存できません。
コントロールの調製：	1)	蒸留水を添加して溶解します。液量、溶解後の濃度は、キットに同梱されているデータシートに記載されています。溶解後のコントロールは不安定であり、保存できません。
サンプルの調製：	1)	サンプルには新鮮なEDTA血漿を使用します。測定前に10,000rpmにて30秒遠心をして不溶物を取り除きます。
	2)	EDTA血漿 125μLに対し、脱脂処理試薬 25μLを加え、ボルテックスでよく攪拌します。
	3)	室温にて10分間インキュベートし、10,000rpmにて5分間遠心します。
	4)	脱脂処理した血漿サンプル 100μLに対し、アッセイバッファー 400μLを添加し、ボルテックスにてよく攪拌します。（以上の前処理によりサンプルは6倍希釈されます）
測定手順：	1)	予め全ての試薬を室温に戻しておき、サンプルおよびスタンダードを調製します。
	2)	ウェルにStandard-0～5、コントロールおよびサンプルを200μL分注します。
	3)	マイクロプレートリーダーを使って340nmの吸光度を測定します。
	4)	検量線とサンプルの吸光度からAOPP濃度を計算し、6を掛けます（希釈率補正）。

【使用上のご注意】

1)	使用前にキットを室温（18～26℃）に出し、よく攪拌してください。
2)	スタンダードを含め、全ての測定は２重測定（N=2）にて実施してください。
3)	信頼性の高いデータを得るために、コントロールは毎回測定されることをお奨めします。
4)	異なる試薬ロットの組合せや混合はお避けください。

【ご注意】本製品は研究用試薬です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。

【製品仕様】

● 測定項目：	蛋白質過酸化物（AOPP）
● 測定レンジ：	6.25～100 μmol/L
● 所要時間：	約15分
● サンプル所要量：	125μL（EDTA血漿または尿）
● テスト数：	41テスト（N=2測定時）
● 必要な器具：	マイクロプレートリーダー（測定波長340nm）、遠心機（3000 G）、8チャンネルマイクロピペット（50～250μL）、マイクロピペット（10～1000μL用）、プラスチック試験管、蒸留水など
● 保存条件：	2～8℃

【参考文献】

1)	Witko-Sarsat V, et. Al.: Advanced oxidation protein products as a novel marker of oxidative stress in uremia. Kidney Int., 49(5):1304-13.(1996)
2)	Peng KF, et. Al.: Advanced oxidation protein products induce monocyte chemoattractant protein-1 expression via p38 mitogen-activated protein kinase activation in rat vascular smooth muscle cells. Chin Med J (Engl). 119(13):1088-93 (2006)
3)	Liu SX, et. Al.: Advanced oxidation protein products accelerate atherosclerosis through promoting oxidative stress and inflammation. Arterioscler Thromb Vasc Biol.26(5), p1156-1162 (2006)
4)	Gallardo JM, et. Al.: Inflammation and oxidative stress markers by pentoxifylline treatment in rats with chronic renal failure and high sodium intake. Arch Med Res. 38(1),p34-8.(2007)
5)	Rajdl D, et.al.: Effect of white wine consumption on oxidative stress markers and homocysteine levels. Physiol Res. 2006 Mar 23
6)	Sebekova K, et. Al.: Association of metabolic syndrome risk factors with selected markers of oxidative status and microinflammation in healthy omnivores and vegetarians. Mol Nutr Food Res.50(9),p858-868(2006)
7)	S. Chandramathi, K. Suresh, Z. B. Anita and U. R. Kuppusamy: Comparative assessment of urinary oxidative indices in breast and colorectal cancer patients J Cancer Res Clin Oncol 135(2) p319-323 (2009)

【ご注意】本製品は研究用試薬です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。